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荧光原位杂交技术检测滑膜肉瘤SS18基因易位的诊断价值

时间:2006-11-26栏目:医药卫生论文

  荧光原位杂交技术检测滑膜肉瘤SS18基因易位的诊断价值
  
  王芳 邵琼 张旭 吴秋良 匡亚玲 邵建永
  
  【摘要】  【目的】 探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测石蜡包埋滑膜肉瘤组织中染色体易位的病理学辅助诊断意义?【方法】 收集168例肿瘤标本,其中75例确诊滑膜肉瘤?33例疑似滑膜肉瘤,采用LSI SS18 (18ql1.2)双色断裂分离探针检测SS18基因易位状况;60例非滑膜肉瘤作为阴性对照,制定SS18基因易位阳性的判断阈值?【结果】 165例肿瘤标本成功进行FISH检测,其中129例(78.2%)SS18基因二体性,36例(21.8%)SS18基因多拷贝数?根据建立的SS18基因易位阳性的判断阈值,确诊滑膜肉瘤的病例中85.1%(63/74)可检测到SS18基因易位,余11例结合形态学及免疫组化结果仍诊断为SS;疑似滑膜肉瘤的病例中71.1%(22/31)可检测到阳性结果,余9例最终诊断为其他肿瘤?【结论】 FISH法检测SS18基因易位是滑膜肉瘤诊断的有效辅助手段,滑膜肉瘤的最终诊断及鉴别诊断需结合形态学?免疫组化及分子生物学检测的综合分析?
  
  【关键词】  肉瘤; 滑膜; 原位杂交; 荧光; 诊断
  
  Abstract: 【Objective】 To assess the value of molecular genetics detection of SS18 rearrangement for the diagnosis of synovial sarcoma (SS)。 【Methods】 Interphase FISH with a LSI SS18 (18ql1.2) dual color, break apart probe was utilized in 168 soft tissue tumor specimens including 75 SS in the primary diagnosis, 33 potential SS and 60 non-SS. 【Results】 FISH was available in 165 specimens involved diploid of SS18 gene in 129 cases and multiple copies in 36 ones. According to the cutoff value based on non-SS, 85.1% (63/74) of SS in the primary diagnosis and 71.0% (22/31) of potential SS were considered to be positive for SS18 gene rearrangement. Combined with morphological feature and immunohistochemical results, eleven cases in SS and nine cases in potential SS, negative for SS18 rearrangement, were finally diagnosed with SS and other groups of tumor, respectively. 【Conclusions】 The break-apart interphase FISH test is a powerful aid for diagnosing synovial sarcoma, but results must be intrpreted in the light of morphological features and immunohistochemical data.
  
  Key words: sarcoma; synovial; in situ hybridization; fluorescence; diagnosis
  
  结肠癌是人类主要的恶性肿瘤之一[1],严重威胁着人类的健康?目前结肠癌的发生机制以及有效的抗肿瘤治疗研究通常是在利用人结肠癌细胞株建立裸鼠移植瘤动物模型上进行?而直接利用临床新鲜病例标本构建动物模型并观察动物模型成瘤率的研究报道较少见?本实验将临床背景明确的新鲜结肠癌组织接种于NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠的颈后肩胛皮下,通过对两种品系免疫缺陷小鼠皮下移植瘤的病例成瘤率的观察,进一步了解结肠癌生长特点,从而建立背景清楚的结肠癌动物皮下实体瘤模型,提高瘤株成瘤率,为进一步研究结肠癌发病机理和防治策略奠定基础?
  
  1 材料与方法
  
  1.1 材 料
  
  选用2007年10月至2008年5月期间,经临床病理确诊为结肠癌的临床病例标本12例,人结肠癌标本均来源于广东省人民医院; RPMI1640(含谷氨酰,GIBCO公司);胎牛血清(fetal calf serum, FCS) (Costar 公司) ;胰蛋白酶(Amresco 公司);NOD-Scid小鼠,6 —— 8周;BALB/C裸小鼠,5 —— 6周; SPF级,体质量18 —— 22 g,雌雄兼用,购于北京维通利华实验动物中心?中山大学实验动物中心(动物质量合格证号:0144801?0144566?0053646等),动物饲养在中山大学实验动物中心屏障环境动物实验室(动物实验设施使用证明号:0042645?0042646),饲料?饮水?垫料均高温灭菌,动物自由饮食?
  
  1.2 方 法
  
  1.2.1〓动物皮下实体瘤模型的建立〓从医院手术台上切除患者结肠癌标本之后,立即放入含10 U/L青霉素?10 万U/L 链霉素?无小牛血清的RPMI 1640培养基溶液中,用冰盒送往实验室?在净化工作台上,选取肉眼观察生长良好的新鲜组织块,用含用5倍双抗的生理盐水冲洗3次,然后将组织剪成约3 mm×3 mm 大小的组织块备用[1]?选用NOD-Scid小鼠作为第1代?第2代肿瘤组织接种对象,第3代以后选用NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠?用禁药吸入医学专用法医学专用动物,备皮或并消毒小鼠的右侧肩胛皮肤,把剪好的肿瘤组织块移植于第一代(原代)NOD-Scid小鼠的消毒部位的皮下,每例每次接种5只动物;当第1代肿瘤生长至直径约10 —— 15 mm时,选其中1只皮下肿瘤组织良好的动物,用颈椎脱臼法将动物处死,无菌手术把肿块剥离下来,去除其表面的结缔组织,把肿瘤组织剪成约3 mm × 3 mm大小的块状,用上述的方法转接于NOD-Scid小鼠的右侧颈后肩胛皮下作为第2代荷瘤鼠;第3 —— 5代的肿瘤组织体内传代同时选用NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠,分成2组,每组5只动物,接种方法与上述相同,如此连续进行皮下接种至第5代;观察每个病例每代肿瘤组织在两种品系动物的皮下移植瘤生长情况?
  
  1.2.2 观察指标 ①大体观察各个品系动物每代皮下移植瘤形态? 肿瘤大小以及有否转移;②病例标本在两种动物体内的成瘤率;③常规 HE染色和CDX-2(caudal type ho-meobox transcription factor 2)?CK20(cytokeratin-20)免疫组织化学检测;④瘤块组织p53(mutant type p53)的鉴定,突变型 p53蛋白主要表达于细胞核,呈棕黄色颗粒?p53蛋白过表达的判定标准: p53以肿瘤细胞不着色<10%的肿瘤细胞着色为阴性(-), ≥10%的肿瘤细胞着色为阳性[2-3], 并根据肿瘤阳性细胞数所占比例分为:10% —— 25%(+),26% —— 50%(++),51% —— 75%(+++),>75%(++++)?
  
  2 结 果
  
  2.1 移植瘤大体观察
  
  每次接种结肠癌组织后,每2日观察1次,接种部位未出现

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