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人结肠癌动物皮下实体瘤模型的建立

时间:2006-11-26栏目:基础医学论文

  人结肠癌动物皮下实体瘤模型的建立
  
  黄文革 陈凤英 郭芬芬 刘慰华 李婕 黄河清
  
  【摘要】  【目的】 建立临床背景清楚的结肠癌动物皮下实体瘤模型,为结肠癌发病机制及治疗策略的研究提供可靠的实验动物模型?【方法】 采用组织块直接移植法将收集到的12例结肠癌组织临床标本移植到免疫缺陷小鼠右侧肩胛皮下,第1-2代用NOD-Scid小鼠;将每个病例的第2代皮下肿瘤,分别连续皮下接种至NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠两组动物中,传代至第5代?观察每个病例在两种品系动物的成瘤时间?标本的成瘤率;进行HE染色和CDX-2及 CK20免疫组化检测?【结果】 本实验NOD-Scid小鼠组的第3代和第5代皮下移植瘤的病例成瘤率分别为92%?58%,BALB/C裸小鼠组的分别为75%?50%?病理切片显示肿瘤组织细胞排列成不规则腺体状,有病理性核分裂相?CDX-2?CK20染色呈阳性?【结论】 初步建立了临床背景清楚的人结肠癌的NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究结肠癌发病机理及治疗策略奠定基础?
  
  【关键词】  结肠癌; NOD-Scid小鼠; 裸鼠; 移植瘤模型
  
  Abstract: 【Objective】 To establish subcutaneous solid tumor mice models of human colon cancer which have clear clinical backgrounds. 【Methods】 12 clinical colon cancer specimens were first transplanted to the subcutaneous tissue of right shoulder in NOD-Scid mice by tissue transplantation, Then the passage 2 of the subcutaneous tumor in each cases were implanted contiguously into NOD-Scid mice and BALB/C nude mice, respectively, which were subcultured to passage 5 in mice. The time and rate of tumor formation, HE staining and immunohistochemical examination of CDX-2 and CK20 were observed during the experiment. 【Results】The rates of subcutaneous tumor formation of passage 3 and 5 were 92% and 58% in NOD-Scid mice, while 75% and 50% in nude mice, respectively. The pathological results showed that cells in tumor tissue were gland-like and arranged irregularly, in which pathological nuclear fission was observed. The immunohistochemical stain of CDX-2 and CK20 in cells were positive. 【Conclusions】 The subcutaneous solid tumor models of human colon cancer in NOD-Scid and nude mice were established preliminary, providing a technological foundation for further exploring the pathogenesis and therapy strategy of colon cancer.
  
  Key words: colon carcinoma; NOD-Scid mice; nude mice; transplanted tumor model
  
  多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS),是青春期和育龄妇女常见的生殖内分泌疾病,在育龄期妇女中发病率高达6% —— 10%[1],主要有月经紊乱?持续性排卵障碍?高雄激素血症?高胰岛素血症及卵巢多囊样变等一系列表现;临床表现异质性,约50%的患者合并超重或肥胖?近年来研究发现该疾病的功能紊乱远超出生殖轴,PCOS患者具有肥胖?血脂血糖代谢紊乱等心血管病的高危因素,远期代谢和心血管疾病的危险性增高?研究发现,PCOS女性内皮功能损伤的发生率明显高于正常人群[2],细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule-1,ICAM-1)是反映内皮功能障碍的标志物[3]?本研究通过监测POCS患者血清中sICAM-1的水平,探讨PCOS患者血清sICAM-1与代谢之间的相关性,以预警其发生糖尿病?心血管疾病的风险,以便临床进行早期干预治疗?
  
  1 材料与方法
  
  1.1 研究对象
  
  选择2009年8月至2010年10月就诊于中山大学附属第三医院不育与性医学科门诊的63例PCOS患者为观察对象,纳入标准符合2003年鹿特丹PCOS诊断标准[4]?选择同时期就诊的29例无PCOS 表现,有正常月经周期和排卵,血清生殖激素正常,由于输卵管等其他原因所致不孕症患者为正常对照组?按体质指数BMI≥25 kg/m2为肥胖[5],将63例PCOS患者分为肥胖组(A组,30例)和非肥胖组(B组,33例),29例正常对照组分为非肥胖组(C组,20例)和肥胖组(D组,9例);A组患者年龄(27.40 ± 2.53)岁,B组患者年龄(27.09 ± 5.91)岁;C组患者年龄(28.55 ± 4.40)岁;D组患者年龄(26.56 ± 3.64)岁?4组患者在年龄无明显差异,均排除系统性疾病,6个月内未进行过可能影响下丘脑-垂体-性腺轴功能的药物治疗?
  
  1.2 方法
  
  1.2.1〓一般资料收集〓由专人对受试者测量身高?体质量?血压?腰围?臀围,并进行以下计算:腰臀比(waist/hip ratio,WHR)=腰围(cm)/臀围(cm)?平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)=(收缩压+舒张压×2)/3?
  
  1.2.2〓基础内分泌标本收集〓患者于月经周期第2 —— 5天或闭经患者阴道B超检查没有优势卵泡时早晨空腹抽外周静脉血用化学发光法测定基础性激素? 空腹血糖?血脂?胰岛素?口服葡萄糖耐量(OGTT)试验的检测:嘱患者禁食8 h于次日早晨抽肘静脉血,然后口服葡萄糖75 g,于服糖后60?120 min抽血测葡萄糖,采用特异性葡萄糖氧化酶法?放射免疫法分别测定空腹血糖?血脂?胰岛素?并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR):空腹胰岛素(mIU/L)×空腹血糖(mmol/L)/22.5?胰岛素抵抗(insulin resistant,IR)诊断依据HOMA-IR≥2.5[6]?
  
  1.2.3〓测定sICAM-1〓于抽空腹血糖当日抽取外周静脉血;采用双抗体夹心ELISA测定法测定受试者血清中sICAM-1,各步骤严格按照说明书操作?ELISA试剂盒由杰特伟生物公司提供?
  
  1.3〓统计学方法
  
  采用SPSS 13.0统计软件,计量资料以均数±标准差(x ± s)描述,两组

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