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肺结核病人疱疹病毒感染的检测和临床意义

时间:2006-11-26栏目:基础医学论文

  肺结核病人疱疹病毒感染的检测和临床意义
  
  作者:纪静 许俊华 徐翮飞 罗兵
  
  【摘要】  目的 探讨肺结核病人疱疹病毒活动性感染情况。方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测62例肺结核病人和43例正常对照者血清中人巨细胞病毒(HCMV)和单纯疱疹病毒(HSV)特异性IgM抗体以及EB病毒(EBV)衣壳抗原(VCA)IgM抗体。 同时,采用PCRSouthern检测肺结核病人和正常人外周血单个核细胞中EBV DNA表达。结果 肺结核组血清HCMVIgM和HSVIgM阳性率分别为19.4%和12.9%,正常对照组分别为4.7% 和0,肺结核组HCMVIgM和HSVIgM阳性率均高于正常对照组(χ2=4.75、4.31,P<0.01)。肺结核组和正常对照组均未检测到EB病毒VCAIgM,肺结核组EBV DNA阳性率(48.4%)高于正常对照组(4.7%),差异有显著性(χ2=22.92,P<0.01)。继发性肺结核疱疹病毒感染率(39.6%)高于原发性肺结核(7.1%),差异有显著性 (χ2=3.84,P<0.05)。结论 部分肺结核病人存在HCMV、HSV以及EBV的活动性感染,人疱疹病毒感染可能影响肺结核病情发生发展。
  
  【关键词】  单纯疱疹病毒属;结核,肺;酶联免疫吸附测定
  
  [ABSTRACT]ObjectiveTo explore the active infection of human herpesvirus in patients with tuberculosis (TB)。MethodsThe specific IgM antibodies against human cytomegalovirus (HCMV), herpes simplex virus (HSV) and VCA of EpsteinBarr virus (EBV) in serum of 62 TB patients and 43 normal controls were detected by ELISA, and the expression of EBV DNA in mononuclear cells in peripheral blood of both groups by PCRSouthern.ResultsThe positive rates of antiHCMV and antiHSV IgM in the patients were 19.4% and 12.90%, respectively,and that in the control groups were 4.7% and 0. The positive HCMVIgM and HSVIgM in the patients were higher than that in the controls (χ2=4.75,4.31;P<0.01)。 However, VCAIgM of EBV was not detected in both groups. The positive rate of EBVDNA in the patients (48.4%) was significantly higher than that of the controls (4.7%,χ2=22.92,P<0.01)。 The infection of herpesvirus was higher in secondary TB (39.6%) than primary (7.1%), the difference was significant (χ2=3.84,P<0.05)。ConclusionActive infection of HCMV,HSV and EBV exists in some TB patients,which suggests that human herpesvirus infection might impact the pathogenesis of TB.
  
  [KEY WORDS]Simplexvirus; Tuberculosis, pulmonary; Enzyme linked immunosorbent assay
  
  结核病的发病率近年来有增加趋势,严重危害人类健康,我国每年约有25万人死于各种结核病,位居各类传染病之首,结核病再次成为迫切需要解决的公共卫生问题。结核病病人尤其是重症病人常并发病毒感染,进而可引起难治性结核。人疱疹病毒在人群中具有较高的感染率,通常表现为潜伏感染,当机体抵抗力下降时可引起激活感染。本研究采集62例肺结核病人的血清,检测人巨细胞病毒(HCMV)IgM、单纯疱疹病毒(HSV)IgM和EB病毒衣壳抗原(VCA)IgM抗体及外周血单个核细胞(PBMC)EBV DNA表达,了解肺结核病人疱疹病毒的感染状态,现报告如下。
  
  1  资料与方法
  
  1.1  一般资料
  
  本文62例肺结核病人为2006年7——12月在青岛市胸科医院呼吸科门诊就诊及住院病人,男36例,女26例;年龄15——85岁,平均50岁。诊断均符合世界卫生组织结核病会议修订的诊断标准[1].其中原发性肺结核14例,继发性肺结核48例。正常对照组43例,来自健康查体人群,年龄和性别与肺结核组相匹配。
  
  1.2  特异性IgM抗体的检测
  
  采集正常对照组和肺结核病人外周血,分离血清,采用ELISA法检测HCMVIgM、HSVIgM和VCAIgM 抗体,ELISA检测试剂盒购自德国9VATEC公司。HSV抗体检测试剂盒不分型别,参照试剂盒说明书进行操作,对阳性和可疑阳性标本进行重复检验。
  
  1.3  EBV DNA的检测
  
  1.3.1  DNA样本制备
  
  采集正常对照组和肺结核病人的外周静脉血,EDTA抗凝,分离PBMC,酚氯仿异戊醇法常规提取细胞DNA,预冷无水乙醇沉淀核酸,自然干燥后用TE缓冲液(pH 8.0)溶解DNA,4 ℃ 保存备用。
  
  1.3.2  PCRSouthern
  
  参照文献[2]方法,选用EBV BamHⅠW 区特异性引物和探针,对提取细胞DNA 进行检测,上游引物序列为: 5′CCAGACAGCAGCCAATTGTC3′,下游引物序列为: 5′GGTAGAAGACCCCCTCTTAC 3′,探针序列为:5′CCCTGGTATAAAGTGGTCCTGCAGCTATTTCTGGTCGCATC3′。PCR反应总体积为25 μL,反应体系为:10×Buffer 2.5 μL,MgCl2 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,上下游引物各0.5μmol/L, Taq DNA 聚合酶1.0 U,DNA 模板3 μL,同时设立阳性对照和阴性对照。阳性对照为EBV阳性的B958细胞,阴性对照为EBV阴性细胞系Ramos细胞。扩增条件为:94 ℃预变性5 min;然后94 ℃ 30 s, 55℃ 30 s, 72 ℃ 45 s,扩增35个循环;最后72 ℃延伸5 min.取扩增产物10 μL 以20 g/ L 琼脂糖凝胶电泳后转印到尼龙膜上,与地高辛标记的寡核苷酸探针进行杂交反应,经碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体作用后,加酶的发光底物CSPD 作用5 min,自显影检测杂交信号。
  
  1.4  统计学处理
  
  采用四格表χ2检验进行统计学处理。
  
  2  结 果
  
  2.1  特异性IgM抗体检测
  

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