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HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性

时间:2006-11-26栏目:基础医学论文

  HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性
  
  作者:王笑峰  孙迎娟  罗兵  李慧  王云
  
  【关键词】  HHV6
  
  [摘要]  目的  探讨人疱疹病毒6型(HHV6)和7型(HHV7)感染在类风湿性关节炎(RA)病因学中作用。方法  用巢式PCR技术,检测62例类风湿性关节炎病人和138例健康献血员外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆中HHV6和HHV7 DNA.结果  类风湿性关节炎病人组PBMCs中HHV6和HHV7 DNA阳性率与正常对照组比较均无显著性差异(P>0.05);部分类风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6和HHV7 DNA,而对照组血浆中则为阴性。结论  类风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染,与类风湿性关节炎的发生发展有一定关系。
  
  [关键词]  关节炎,类风湿; 疱疹病毒6型,人;疱疹病毒7型,人;巢式聚合酶链反应
  
  RELATIONSHIP BETWEEN HHV6 AND HHV7 INFECTION AND RHEUMATOID ARTHRITISWANG XIAOFENG, SUN YINGJUAN, LUO BING,  et al (Department of Microbiology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China)
  
  [ABSTRACT]ObjectiveTo investigate the role of human herpesvirus 6 and 7 (HHV6, HHV7) infection in the etiology of rheumatoid arthritis (RA)。MethodsHHV6 and HHV7 DNA from the plasma and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were tested with nested PCR in 62 RA patients and 138 matched healthy adult donors. ResultsThe differences of positive rates of HHV6 DNA and HHV7 DNA in PBMCs of the patients were not significant compared with those of the healthy controls (P>0.05); HHV6 and HHV7 & DNA were detected in the plasma of some patients but negative in the plasma of the controls.ConclusionHHV6 and HHV7 DNA are present in the plasma of some RA patients, which suggests that the active infection of HHV6 and HHV7 may be related to the pathogenesis of RA.
  
  [KEY WORDS]rheumatoid arthritis; human herpsvirus 6; human herpsvirus 7; nested polymerase chain reaction
  
  人疱疹病毒6型和7型(HHV6和HHV7)是新近发现的对T淋巴细胞具有高度亲嗜性的新型疱疹病毒,人群中感染十分普遍。原发感染多见于6月——2岁婴幼儿,原发感染后通常以潜伏形式长期存在于宿主体内,在人体免疫力下降或免疫抑制状态下可被激活,导致活动性感染。国内外学者对该病毒与人体免疫功能的相互关系给予了极大关注。类风湿性关节炎(RA)是一种原因不明的自身免疫性疾病,通常认为是由多种因素诱发人体自身免疫反应而致病。有资料表明,某些病毒感染可促进人体自身免疫反应而成为自身免疫性疾病的诱发因素,但有关HHV6和HHV7感染与自身免疫性疾病关系的研究报道不多。本文以RA病人和健康人为研究对象,用巢式PCR检测其外周血细胞单个核细胞(PBMCs)和血浆中HHV6 和HHV7 DNA,进一步探讨HHV6 和 HHV7感染与RA的相关性。
  
  1  材料与方法
  
  1.1  对象
  
  RA病人62例,为2002年10月——2002年12月在青岛大学医学院附属医院内科、骨科和风湿免疫科门诊就诊及住院病人,均符合1992年美国心脏病协会修订的Jones标准。其中男12例,女28例;年龄10——62岁,平均(34.23±14.70)岁。同期选择性别和年龄与之相应的青岛市中心血站健康献血员138例作为对照。
  
  1.2  方法
  
  1.2.1  标本处理  抽取受试者静脉血4 mL, ACD无菌抗凝, 1 200 r/min离心10 min,吸取中间白膜层,酚氯仿异戊醇法常规提取外周血细胞DNA,同时分离血浆置-20 ℃保存备用。
  
  1.2.2  血浆PCR模板制备  50 μL血浆加50 μL裂解液,煮沸5 min,以8 000 r/min离心5 min,取上清作为PCR 反应模板。
  
  1.2.3  PBMCs中HHV6和HHV7 DNA的检测采用巢式PCR方法。PCR引物设计及巢式PCR反应条件均参照文献 [1],引物由上海生工生物技术服务有限公司合成。引物序列见表1.同时设立阳性对照和阴性对照,HHV6阳性对照为HHV6标
  
  表1  巢式PCR引物序列(略)
  
  取PCR产物10 μL,20 g/L琼脂糖凝胶(含0.5 mg/L EtBr)中电泳,80 V、1 h,紫外线透射仪下观察结果。HHV6外侧PCR扩增产物为287    bp,内侧PCR扩增产物为163 bp;HHV7外侧PCR扩增产物为186 bp,内侧PCR扩增产物为124 bp.
  
  1.2.4  限制性酶切分析  取HHV6、HHV7内侧PCR阳性扩增产物分别用HindⅢ和 EcoRⅠ进行限制性内切酶分析。酶切产物于120 g/L聚丙烯酰胺凝胶中电泳,80V、90 min,凝胶用EtBr(0.5 mg/L)染色20 min.紫外线透射仪下观察结果。
  
  1.3  统计学分析
  
  采用SPSS四格表卡方检验。
  
  2  结    果
  
  2.1  HHV6 DNA检测RA病人PBMCs中有34例HHV6 DNA阳性,阳性率为54.84%;对照组PBMCs中有73例HHV6 DNA阳性,阳性率为52.90%(见图1)。两组 HHV6 DNA阳性检出率差异无显著意义(χ2=0.002,P>0.05)。34例PBMCs HHV6阳性RA病人血浆中23例检测出HHV6 DNA ,阳性率为37.10%,而对照组血浆中未发现HHV6 DNA阳性者。
  
  2.2  HHV7 DNA检测
  
  RA病人PBMCs中有38例HHV7 DNA阳性,阳性率为61.29%;对照组PBMCs中有80例HHV6  DNA阳性,阳性率为57.97%(见图

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