HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性
1）。两组HHV7 DNA阳性检出率差异无显著意义
图1 部分标本PBMCs中HHV6、HHV7 DNA 内侧 PCR检测结果
2.3 PCR产物的限制性酶切分析
HHV6内侧PCR阳性扩增产物（163 bp），经限制性核酸内切酶Hind Ⅲ酶切后可观察到两种情况，HHV6A酶切产物为 66 bp和97 bp 两条带，而HHV6B不被消化仍为163 bp的内侧PCR扩增条带。RA病人组34例HHV6阳性者中，有30例病人为HHV6B型（88.24%），有4例为HHV6A型（11.76%）；73例HHV6阳性正常对照者中HHV6A型占17.81%（13/73），HHV6B型占82.19%（60/73）。RA病人组与正常对照组HHV7内侧PCR阳性扩增产物（124 bp）经限制性内切酶EcoRⅠ消化后均出现79 bp和54 bp两条带，证明为特异性扩增条带。
3 讨 论
HHV6和HHV7是两种普遍存在的人类疱疹病毒，均属β疱疹病毒亚科，具有高度的T淋巴细胞亲嗜性，而且两者具有较高的同源性。HHV6和HHV7原发感染后在人体内长期存在，具有潜伏活动的生物学特征。根据HHV6分离毒株抗原性、感染宿主范围、限制性酶切图谱及其序列分析，将HHV6分为两组，即人疱疹病毒6型A组和B组。HHV6的原发感染主要为HHV6B感染。有研究提示，HHV6和HHV7与自身免疫性疾病的发生有一定关系，其中CD4分子是HHV6和HHV7重要的受体，SECCHIERO等[6]研究显示，HHV7感染CD4+细胞后，能引起CD4分子下调。HHV6、HHV7与其他病毒如EBV和HCMV 1期王笑峰，孙迎娟，罗兵，等HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性55可共同导致宿主复合感染、B淋巴细胞多克隆激活，机体免疫功能异常。近年来的研究显示，器官移植和免疫抑制病人HHV6和HHV7检出率明显高于正常人，表明免疫抑制的病人非常容易感染HHV6和HHV7或导致潜伏的病毒激活，HHV6和HHV7的激活又可加重这些疾病的进程[3].RA是一种全身性T细胞构成和功能紊乱导致的以关节滑膜损伤为主要表现的自身免疫性疾病，其诱因是多方面的。大量研究资料表明，RA与病毒感染有关，EBV感染是RA始动因子，与类风湿沉淀素的产生直接相关，而HHV6、HHV7感染则可反式激活EBV.细胞因子在RA的发病机制中亦发挥着重要的作用，RA病人的血清及关节液中可检测出高水平的IL1和TNFα，IL1是一种促炎细胞因子，尤其是IL1β为RA关节软骨破坏最重要的一种细胞因子。TNFα主要由单核巨噬细胞产生，YOCCUM等[4]认为在RA活动期或进展期，TNF呈高水平分泌，导致一系列临床症状及局部关节组织的破坏，慢性期TNFα水平相对较低且稳定。SAXNE等[5]认为血清中TNFα升高可能提示疾病的活动性或严重性， TNFα与IL1被称为“姊妹细胞因子”,共同起到“中心罪犯”的作用。此外，IL1β和TNFα尚能诱导致炎细胞因子IL6和IL8的产生， 在RA发病中国共产党同发挥作用。已有研究证实，HHV6感染可导致PBMC合成IL2降低，诱导细胞因子IL1β和TNFα的产生，表明HHV6感染在自身免疫疾病中可直接发挥作用。研究证实，健康人PBMC中可检测到HHV6 和HHV7 DNA,且HHV6和HHV7潜伏感染状态可被某些影响因素激活，从潜伏感染病人PBMC中可检出低水平的HHV6和HHV7 DNA[6]. 本研究以RA病人以及健康献血员为研究对象，采用巢式PCR技术检测PBMC中HHV6和HHV7 DNA,提高了检测的敏感性和特异性，结果显示，病人组与对照组HHV6和HHV7阳性率无显著性差异，提示HHV6和HHV7感染与RA无明显相关性，与COOKE等[7]的研究结果相同。病人体内是否存在HHV6和HHV7的复发性激活，疾病的发生发展是否与HHV6和HHV7再激活有关，须确定HHV6和HHV7活动性感染检测指标。SECCHIERO等[8] 研究表明，血浆、血清和体液中游离HHV6和HHV7 DNA的存在标志着HHV6和HHV7的活动性感染。本文结果显示，部分RA病人血浆中可检测到HHV 6和HHV7 DNA,而对照组为阴性，提示部分病人体内有HHV6和HHV7的活动性感染，其是否与疾病的发生发展相关还有待进一步实验研究。此外，本研究中只有2例RA病人血浆中同时检测出HHV6和HHV7 DNA,这可能由于HHV7感染能激活潜伏状态的HHV6,而HHV6一旦被激活后有优势增殖现象，反而抑制了HHV7的增殖，从而引起一系列与HHV6有关的疾病。深入研究病毒间相互激活的过程，更有助于对疾病的病因学及治疗学的探讨。综上所述，HHV6 和HHV7的活动性感染可能与RA的发生发展有关，HHV6和HHV7活动性感染指标的检测对研究其与疾病的确切关系具有重要意义。有关HHV6和HHV7在RA病因学中的确切作用还有待进一步研究证实。
[参考文献]
[1]BERNEMAN Z N, ABLASHI D V, LI G, et al. Human herpesvirus 7 is a Tlymphotropic virus and is related to, but significantly different from, human herpesvirus 6 and human cytomegalovirus[J]. Pro Natl Acad Sci USA, 1992,89:10552.
[2]SECCHIERO P, GIBELLINI D, FLAMAND I, et al. Human herpesvirus 7 induces the downregulation of CD4 antigen in lymphoid T cells without affecting p56lck levels[J]. J Immunol,1997,159:341.
[3]EMERY V C. Human herpesvirus 6 and 7 in solid organ transplant recipients[J]. Clin Infect Dis,2001,32:1357.
[4]YOCCUM D E,ESPARZA L,DUBRY S,et al. Characteristics of tumor ecrosis factor production in rheumatoid arthritis[J]. Cell Immunol,1989,122:131.
[5]SAXNE T,PALLADINO M A,HEINEGARD D,et al. Detection of tumor necrosis factor α but not tumar necrosis factor β in rheumatoid arthritis synovial fluid and serum[J]. Arthritis and Rheum,1988,31:1041.
[6]KONDO K, KONDO T, OKUNO T. Latent human herpesvirus 6 infection of human monocyte/maerophages[J]. J Gen Virol,1991,72:1401.
[7]COOKE S P, RIBGY S P, GRIFFITH D J, et al. Viral studies in rheumatic disease[J]. Ann Med Internet（Paris），1998,149:30.
[8]SECCHIERO P, CARRIGAN D R, ASANO Y, et al
图1 部分标本PBMCs中HHV6、HHV7 DNA 内侧 PCR检测结果
2.3 PCR产物的限制性酶切分析
HHV6内侧PCR阳性扩增产物（163 bp），经限制性核酸内切酶Hind Ⅲ酶切后可观察到两种情况，HHV6A酶切产物为 66 bp和97 bp 两条带，而HHV6B不被消化仍为163 bp的内侧PCR扩增条带。RA病人组34例HHV6阳性者中，有30例病人为HHV6B型（88.24%），有4例为HHV6A型（11.76%）；73例HHV6阳性正常对照者中HHV6A型占17.81%（13/73），HHV6B型占82.19%（60/73）。RA病人组与正常对照组HHV7内侧PCR阳性扩增产物（124 bp）经限制性内切酶EcoRⅠ消化后均出现79 bp和54 bp两条带，证明为特异性扩增条带。
3 讨 论
HHV6和HHV7是两种普遍存在的人类疱疹病毒，均属β疱疹病毒亚科，具有高度的T淋巴细胞亲嗜性，而且两者具有较高的同源性。HHV6和HHV7原发感染后在人体内长期存在，具有潜伏活动的生物学特征。根据HHV6分离毒株抗原性、感染宿主范围、限制性酶切图谱及其序列分析，将HHV6分为两组，即人疱疹病毒6型A组和B组。HHV6的原发感染主要为HHV6B感染。有研究提示，HHV6和HHV7与自身免疫性疾病的发生有一定关系，其中CD4分子是HHV6和HHV7重要的受体，SECCHIERO等[6]研究显示，HHV7感染CD4+细胞后，能引起CD4分子下调。HHV6、HHV7与其他病毒如EBV和HCMV 1期王笑峰，孙迎娟，罗兵，等HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性55可共同导致宿主复合感染、B淋巴细胞多克隆激活，机体免疫功能异常。近年来的研究显示，器官移植和免疫抑制病人HHV6和HHV7检出率明显高于正常人，表明免疫抑制的病人非常容易感染HHV6和HHV7或导致潜伏的病毒激活，HHV6和HHV7的激活又可加重这些疾病的进程[3].RA是一种全身性T细胞构成和功能紊乱导致的以关节滑膜损伤为主要表现的自身免疫性疾病，其诱因是多方面的。大量研究资料表明，RA与病毒感染有关，EBV感染是RA始动因子，与类风湿沉淀素的产生直接相关，而HHV6、HHV7感染则可反式激活EBV.细胞因子在RA的发病机制中亦发挥着重要的作用，RA病人的血清及关节液中可检测出高水平的IL1和TNFα，IL1是一种促炎细胞因子，尤其是IL1β为RA关节软骨破坏最重要的一种细胞因子。TNFα主要由单核巨噬细胞产生，YOCCUM等[4]认为在RA活动期或进展期，TNF呈高水平分泌，导致一系列临床症状及局部关节组织的破坏，慢性期TNFα水平相对较低且稳定。SAXNE等[5]认为血清中TNFα升高可能提示疾病的活动性或严重性， TNFα与IL1被称为“姊妹细胞因子”,共同起到“中心罪犯”的作用。此外，IL1β和TNFα尚能诱导致炎细胞因子IL6和IL8的产生， 在RA发病中国共产党同发挥作用。已有研究证实，HHV6感染可导致PBMC合成IL2降低，诱导细胞因子IL1β和TNFα的产生，表明HHV6感染在自身免疫疾病中可直接发挥作用。研究证实，健康人PBMC中可检测到HHV6 和HHV7 DNA,且HHV6和HHV7潜伏感染状态可被某些影响因素激活，从潜伏感染病人PBMC中可检出低水平的HHV6和HHV7 DNA[6]. 本研究以RA病人以及健康献血员为研究对象，采用巢式PCR技术检测PBMC中HHV6和HHV7 DNA,提高了检测的敏感性和特异性，结果显示，病人组与对照组HHV6和HHV7阳性率无显著性差异，提示HHV6和HHV7感染与RA无明显相关性，与COOKE等[7]的研究结果相同。病人体内是否存在HHV6和HHV7的复发性激活，疾病的发生发展是否与HHV6和HHV7再激活有关，须确定HHV6和HHV7活动性感染检测指标。SECCHIERO等[8] 研究表明，血浆、血清和体液中游离HHV6和HHV7 DNA的存在标志着HHV6和HHV7的活动性感染。本文结果显示，部分RA病人血浆中可检测到HHV 6和HHV7 DNA,而对照组为阴性，提示部分病人体内有HHV6和HHV7的活动性感染，其是否与疾病的发生发展相关还有待进一步实验研究。此外，本研究中只有2例RA病人血浆中同时检测出HHV6和HHV7 DNA,这可能由于HHV7感染能激活潜伏状态的HHV6,而HHV6一旦被激活后有优势增殖现象，反而抑制了HHV7的增殖，从而引起一系列与HHV6有关的疾病。深入研究病毒间相互激活的过程，更有助于对疾病的病因学及治疗学的探讨。综上所述，HHV6 和HHV7的活动性感染可能与RA的发生发展有关，HHV6和HHV7活动性感染指标的检测对研究其与疾病的确切关系具有重要意义。有关HHV6和HHV7在RA病因学中的确切作用还有待进一步研究证实。
[参考文献]
[1]BERNEMAN Z N, ABLASHI D V, LI G, et al. Human herpesvirus 7 is a Tlymphotropic virus and is related to, but significantly different from, human herpesvirus 6 and human cytomegalovirus[J]. Pro Natl Acad Sci USA, 1992,89:10552.
[2]SECCHIERO P, GIBELLINI D, FLAMAND I, et al. Human herpesvirus 7 induces the downregulation of CD4 antigen in lymphoid T cells without affecting p56lck levels[J]. J Immunol,1997,159:341.
[3]EMERY V C. Human herpesvirus 6 and 7 in solid organ transplant recipients[J]. Clin Infect Dis,2001,32:1357.
[4]YOCCUM D E,ESPARZA L,DUBRY S,et al. Characteristics of tumor ecrosis factor production in rheumatoid arthritis[J]. Cell Immunol,1989,122:131.
[5]SAXNE T,PALLADINO M A,HEINEGARD D,et al. Detection of tumor necrosis factor α but not tumar necrosis factor β in rheumatoid arthritis synovial fluid and serum[J]. Arthritis and Rheum,1988,31:1041.
[6]KONDO K, KONDO T, OKUNO T. Latent human herpesvirus 6 infection of human monocyte/maerophages[J]. J Gen Virol,1991,72:1401.
[7]COOKE S P, RIBGY S P, GRIFFITH D J, et al. Viral studies in rheumatic disease[J]. Ann Med Internet（Paris），1998,149:30.
[8]SECCHIERO P, CARRIGAN D R, ASANO Y, et al
- 上一篇论文： 内窥镜消毒与职业防护
- 下一篇论文：